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病原體檢測試劑盒操作的幾大要點須知

  • 發布日期:2022-06-13      瀏覽次數:364
    •   病原體檢測試劑盒是一種經典的利用DNA熒光染色法檢測支原體污染的試劑盒,其原理是當細胞發生凋亡時,染色質會固縮,Hoechst染色后在熒光顯微鏡下觀察,正常細胞的細胞核呈正常的藍色,而凋亡細胞的細胞核會呈致密濃染,或呈碎塊狀致密濃染,顏色有些發白。
       
        病原體檢測試劑盒操作步驟:
       ?。ㄒ唬┵N壁細胞
        1、將蓋玻片置于6孔板或其他培養皿內,接種細胞培養過夜,使融合率約為50%~80%。
        2、加入干預條件使細胞發生凋亡后,吸盡培養液,加入Hoechst固定液。
        3、去除固定液,用PBS或生理鹽水洗2次。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
        4、加入Hoechst 染色液,孵育。也宜用搖床,或手動晃動數次。
        5、棄染色液,PBS或生理鹽水洗2次,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
        6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,避免氣泡。
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        1、加入Hoechst固定液,緩緩懇起細胞,固定10min或更長時間(亦可4℃過夜)。
        2、低速離心去除固定液,用PBS 或生理鹽水洗2次。洗滌時手動晃動數次。
        4、稍晾干,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
        5、均勻滴上Hoechst染色液。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。
        6、棄染色液,用PBS或生理鹽水洗2次,吸盡液體。洗滌時宜用搖床手動。
        7、滴一滴抗熒光封片劑于載玻片上,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。
        8、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。
       ?。ㄈ┙M織切片
        1、常規包埋切片。用PBS 或生理鹽水洗2次。洗滌時手動晃動數次。
        2、均勻滴上Hoechst染色液。.
        3、棄染色液,PBS或生理鹽水洗2次,吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動。
        4、將切片置于載玻片上,滴一滴抗熒光封片劑,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。
        5、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右,發射波長460nm左右。
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